TRIzol影响实验结果？miRNA文章被撤回

小丫

2012-7-6
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* P4 Z' U2 j, ]" X! M8 u" x& a韩国首尔大学的科学家Narry Kim(金娜蕊)及其研究小组近日撤回了一篇关于microRNA(miRNA)衰减的文章，因为她们发现，所用的TRIzol试剂会对富含GC的miRNA或具二级结构的miRNA产生不同影响。

　　这篇文章去年发表于《Molecular Cell》杂志上。研究人员发现，一旦细胞粘附性丧失，某些miRNA迅速降解。当他们以低密度培养细胞或用胰酶或EGTA解离细胞时，细胞内成熟 miR-141表达水平显著下降，而来自同一个转录本(pri-miR-200c~141)的miR-200c不受影响。当细胞解离时，放线菌素D对转录的阻断导致miR-141的迅速耗尽，半衰期不到1小时，从而表明miR-141是通过高速衰减而导致表达水平发生迅速改变的。在进一步的研究中，研究人员通过其他的miRNA包括miR-200a, miR-34a, miR-29b, miR-301a, 和 miR-21再次验证了这一调控机制。(详细报道请看：http://www.ebiotrade.com/newsf/2011-9/2011926123556850.htm)
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/ \( v/ E( U  Y, e3 b　　然而，Narry Kim研究小组近日撤回了该文章。她们在撤回声明中写道：“基于我们的结果，我们认为，一些miRNA会根据细胞的粘附状态而选择性丧失稳定性。然而，在后续研究中，我们发现，低GC含量的miRNA(如miR-141、miR-29b、miR-21、miR-106b、miR-15a和miR-34a)会在样品制备阶段选择性丢失，而不是在细胞中降解。”
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　　此外，Kim及她的同事还发表了新的数据，将TRIzol RNA分离方法与另一种不太常用的mirVana方法进行了比较，应用在高密度和低密度细胞样品上。利用TRIzol，她们发现，低密度培养物中的 miR-141水平低于高密度培养物。然而，利用mirVana方法，两者只有轻微的差异。
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　　作者认为，两个操作步骤的数据不一致提出了一个严重的问题，即某些miRNA可能在RNA制备过程中丢失，这取决于选择的操作步骤。
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# Z3 Q: m6 Z" Q; C) c; N" j　　Kim谈道：“科学家不可避免地会承认一些假设，而它们后来被证明是错误的。我们也存在一些技术限制，而在研究的时候未被发现。因此，得出错误的结论有时是不可避免的。最重要的是要诚实，一旦我们意识到，就要纠正错误。”
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( c# v( c3 z; m1 m5 f# O　　对于miRNA的分离，很多实验室都是使用TRIzol试剂。但从这篇文章的结论来看，TRIzol很可能会影响部分实验结果。吸取Narry Kim的教训，大家最好还是采用两种分离方法，来验证结果的可靠性。同时，希望Life Tech的研发部门好好研究一下，发布更为可靠的操作步骤。